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动物细胞的培养技术自上世纪初出现以来，经历了一个多世纪的发展，获得了很大的进步。不仅建立了许多细胞系和培养了许多类型的原代细胞，而且开发了人工合成培养基和无血清培养基，并且出现了细胞工程，哺乳动物细胞的大规模培养获得了工业化的应用，用于生产重组蛋白、单克隆抗体等生物药、载体病毒、病毒性疫苗等。

支原体通常附着在细胞的表面，并影响其宿主细胞的生理、遗传等多方面的正常功能，用这些污染后貌似正常的细胞做实验或生产，将会严重影响结果。

洁净台、细胞培养箱内部、培养箱水槽、液氮罐，培养间内部的水浴锅等环境被支原体污染，可对工作区域进行消毒

细胞培养过程中，由于实验环境、操作者鼻腔口腔、实验器材等很多地方都有支原体的存在。因此，细胞发生支原体污染的频率很高。

胎牛血清作为天然培养基被实验室和科研单位广泛使用，它富含细胞生长中的各种营养成分，但是也容易受到病毒感染，从而给细胞培养带来潜在的干扰。

通常，如果怀疑细胞有支原体污染，可直接取细胞上清进行支原体PCR检测。因为存在支原体污染的细胞上清中，支原体密度为通常为106-108个/ml，已足以用于PCR检测

对于消毒剂，药典有抑菌效力的检查，那么对于支原体祛除喷雾，是否有对支原体祛除效果的验证呢？

现在，PCR试剂盒常用于各种检测。其中最低检出限是PCR试剂盒一个重要的参数。PCR最低检出限就是所能检测到的靶标的最低值。

尽管无血清培养是疫苗生产工艺的发展趋势，但仍有许多生产细胞仍采用基础培养基+新生牛血清的培养工艺。

培养细胞时，要避免细菌污染。如果存在细菌污染，则培养液一般会浑浊变黄，对细胞生长影响明显，细胞大多在24小时死亡。

PCR方法已广泛用于科研，在工业中也有不断扩大应用的趋势，它包括检测一些病原体、检测支原体污染、检测细菌污染以及检测残留宿主DNA等。

支原体有多种检查方法，其中荧光法检测支原体DNA是药典记载的方法，又被称为DNA染色法或指示细胞培养法。

牛血清是重要的细胞培养添加成分，但目前牛血清的类型有胎牛血清、新生牛血清、补铁新生牛血清等，其性能和价格均不相同。

对于高灵敏的PCR技术来说，少量的DNA污染就可导致PCR假像或假阳性。污染的DNA来自于气溶胶中的DNA片段

胎牛血清主要的作用就是提供基本的营养物质以及提供接触和伸展因子，它 是采自5-8个月胎龄牛胚胎中的胎血。

临床细胞治疗、疫苗、细胞基质、病毒收获液等都需要进行支原体检查，以保证其安全性。以往药典规定了培养法和指示细胞染色法。但根据近年报道，谈一下PCR方法的优越性。

有些实验人员报告，细胞培养时在镜下发现有小黑点。 这是有污染吗?应如何处理?

以PCR为代表的核酸扩增技术自1988年发明以来，已广泛应用于科研和临床，但用于生物制药则较晚，这是因为标准化的建立需要一定的时间。

一般胎牛血清检查外源因子是一个重要方面，大部分外源因子都是微生物，有些是微生物的片段，如内毒素，另有一种特别的外源因子，是牛病毒性腹泻病毒（BVD）抗体，它还包括1型和2型。那么为什么要查这一因子呢？

在疫苗生产、生物制药和细胞培养试验中，支原体污染的预防和祛除，是保证生产质量和实验顺利的重要环节。