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普通PCR是一代PCR，使用普通PCR扩增仪扩增，并通过琼脂糖凝胶电泳对产物进行定性分析。 实时荧光定量PCR（(Quantitative Real-time PCR,qPCR)，也叫Real-Time PCR，是二代PCR，是指在PCR扩增反应体系中加入荧光染料或荧光基团，在整个PCR过程中通过收集荧光信号实时监测每一个循环中扩增产物量的变化，最后通过标准曲线和CT值对待测样品进行定量分析。qPCR常用的有两种方法:荧光染料法(SYBR Green l)和荧光探针法(TaqMan)

疫苗是将病原微生物(如细菌、立克次氏体、病毒等)及其代谢产物，经过人工减毒、灭活或利用基因工程等方法制成的用于预防传染病的自动免疫制剂。疫苗保留了病原菌刺激动物体免疫系统的特性。当动物体接触到这种不具伤害力的病原菌后，免疫系统便会产生一定的保护物质，如免疫激素、活性生理物质、特殊抗体等；当动物再次接触到这种病原菌时，动物体的免疫系统便会依循其原有的记忆，制造更多的保护物质来阻止病原菌的伤害。

细胞培养是一种模拟细胞体内生长环境的人工技术，它在无菌、适宜温度及酸碱度的条件下，保证充足的营养以促进细胞的生长和繁殖，并维持其结构和功能。胎牛血清（Fetal Bovine Serum, FBS）是细胞培养中常用的天然培养添加物，它含有丰富的细胞生长必需的营养物质，对动物细胞尤其是干细胞的体外存活和生长具有重要作用。

细胞培养

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血清中含有各类血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等成分。其中血蛋白可以作为载体蛋白携带小分子物质用来维持细胞生长，其中各类蛋白还能起到缓冲酸碱值的作用，各类生长因子可以帮助细胞更好的完成贴壁生长以及减少细胞运动中产生的机械损伤。

支原体是真核细胞培养中普遍发生且非常严重的一种污染源。据统计，4-92%的真核细胞污染均是由支原体导致的。支原体污染不但会导致细胞表型特征发生改变，且会导致细胞生长缓慢。由于支原体来源广泛，细胞培养过程中很容易引入污染源。支原体可通过0.45μm滤膜，因其没有细胞壁，对抗生素不敏感，同时其不会造成培养基的pH值、颜色及浊度变化，故细胞被支原体污染后很难被观察得到。支原体污染细胞后，几乎能影响每一个细胞参数。其可能导致细胞染色体的异常和损伤，改变细胞的代谢、生长、形状、附着，甚至会影响到基因表达。

我们在进行细胞实验时，或多或少都经历过细胞污染的情况，一旦出现细胞污染的情况，全部细胞扔掉难免觉得可惜，之前花的时间、精力也全部打了水漂。

在实验室中，支原体污染是一个常见且难以察觉的问题，它不仅影响细胞培养的质量和实验结果的准确性，还可能对生物制品的安全性造成威胁。以下是一些有效的支原体污染处理方法：

细胞培养是一种模拟细胞体内生长环境的人工技术，它在无菌、适宜温度及酸碱度的条件下，保证充足的营养以促进细胞的生长和繁殖，并维持其结构和功能。胎牛血清（Fetal Bovine Serum, FBS）是细胞培养中常用的天然培养添加物，它含有丰富的细胞生长必需的营养物质，对动物细胞尤其是干细胞的体外存活和生长具有重要作用。

实验环境中支原体污染避免的方法 细胞培养中要从多方面避免支原体的污染

胎牛血清

胎牛血清

胎牛血清

细胞培养

PCR技术的全称是Polymerase Chain Reaction，即聚合酶链式反应。简单来说，它就是在体外模拟DNA复制的过程，通过特定的引物和DNA聚合酶，将目标DNA片段在短时间内大量扩增。PCR是一种选择性体外快速扩增DNA片段的方法。在体外以类似于细胞内DNA的半保留复制过程，以拟扩增的模板DNA分子，与模板DNA互补的核苷酸引物、DNA聚合酶、4种dNTP及适合的缓冲体系组成的反应体系，经过重复地变性一退火一延伸三步，扩增新的目的DNA链，这个过程通过控制反应体系的温度来实现。

在实验室工作中，高效预防或清除微生物污染十分重要。今天，我们来讨论一下实验中，如何预防，清除微生物。

透析型胎牛血清是采用半透膜超滤去除胎牛血清中分子量小于10,000Da的成分，如葡萄糖、盐类、非蛋白结合分子，还包括血清中的一些激素、细胞因子、氨基酸、核苷酸及其它内源分子等，因此可能会降低对某些细胞系的生长促进能力。该血清4℃下进行，严格控制pH值、渗透压，并将葡萄糖水平限制至低于0.5mg/ml。

由于支原体污染无法肉眼识别，因此应定期采用试剂盒对细胞培养物中的支原体进行监测。北京缔一生物科技有限公司 国内总代理 德国 MB 品牌）   Venor®GeM qOneStep