细胞培养中的“隐形威胁”：支原体污染

在细胞培养的日常工作中，我们时常会遇到一些显而易见的污染，比如细菌或真菌。但还有一种更为隐蔽的污染源——支原体，它难以察觉，却可能对细胞状态和研究结果产生深远影响。

一、支原体：一个难以察觉的挑战

支原体是目前已知能独立生存的最小微生物之一。它最显著的特点是缺乏细胞壁，这一特性带来两个直接后果：首先，它能够轻易穿过常规的0.22μm滤膜，导致灭菌过滤失效；其次，针对细胞壁合成的抗生素（如青霉素）对它完全无效。

更棘手的是，支原体污染在早期通常不会引起培养液浑浊或细胞快速死亡等明显变化，这使得它能在不知不觉中持续影响培养体系。

二、污染如何发生及潜在影响

支原体污染的来源多样，主要可能通过实验操作人员、污染的细胞系或培养试剂（尤其是血清）引入。一旦发生，它虽不立即杀死细胞，但会通过多种方式干扰实验：

· 改变细胞代谢和生长状态，可能导致增殖放缓或形态改变。

· 消耗培养液中的关键营养物质，同时分泌代谢产物影响细胞功能。

· 在共培养中干扰细胞间的相互作用，可能影响信号通路研究。

· 对细胞基因组稳定性构成潜在威胁。

这些影响会直接降低实验数据的可靠性和可重复性。

三、识别与确认污染的方法

由于缺乏肉眼可见的迹象，依赖专业检测手段至关重要：

1. PCR法：目前最常用、快捷的方法，灵敏度高，可快速检测多种常见支原体。

2. 荧光染色法：使用特异性染料，在荧光显微镜下可观察到附着在细胞表面或散落在细胞周围的支原体DNA。

3. 培养法：将待测样本接种于专用支原体肉汤培养基，观察变化。此法耗时较长，但作为经典方法仍有其价值。

4. 专业检测服务：许多生物公司提供快捷、灵敏的检测服务，适合定期筛查。

四、应对与预防策略

一旦确认污染，情况往往比较棘手。常见的处理方式包括：

· 使用专用试剂：如市场上的支原体清除试剂，但需注意其对细胞可能产生的压力。

· 果断放弃：对于珍贵程度不高的细胞系，最稳妥的方式是及时废弃，并对环境进行彻底清洁，防止扩散。

相比之下，预防是远胜于治疗的最佳策略：

· 规范操作：严格执行无菌操作规程，是所有预防工作的基础。

· 来源控制：对新引入的细胞系进行严格的入库检测，确保来源清晰可靠。

· 定期筛查：建议对所有正在培养的细胞系，每1-3个月进行一次常规支原体检测。

· 合理管理：将不同细胞系分开操作，避免交叉污染。

· 试剂选择：选用质量有保障的培养试剂。