原代细胞培养小技巧

原代细胞培养也被称为初代培养，是建立细胞系的第一步。

原代细胞培养的应用广泛：

1. 为研究生物体细胞的生长、代谢、繁殖提供有力的手段；
2. 为传代培养创造条件；
3. 服务于临床实践，用于药物筛选等。

其步骤包括取材→分离→培养和维持。

原代细胞培养需要一定的技巧，尤其是一些细节，不然很容易翻车，今天给大家汇总了一些原代细胞培养的小技巧，希望大家能有所收获！

取材

取材是原代细胞培养过程中的第一步，也是至关重要。

下表为一些常见组织的取材注意事项。

 

分离

 

一、组织块培养法

 

1、组织块接种后的前3天，在观察和移动的过程中，注意不要引起液体的振荡。为保证组织块附着于瓶壁上，要避免频繁晃动。

 

2、加入的培养液不宜过多，避免浸泡的组织块受轻微的波动而脱落下来。

 

3、当细胞向外迁徙出来后要注意记录并去除漂浮的组织块和残留的细胞，它们产生的有毒物质会影响原代细胞的生长。

 

4、为促进组织块尽快粘贴在培养瓶皿上，可以在种植前先将胶原薄层涂在培养瓶底壁上。

 

二、贴壁型原代细胞

 

1、原代培养的分离细胞，在初次接触体外环境时，细胞之间会互相影响，产生一些促生长的活性物质，促进彼此的存活和生长。

 

因此，接种密度要适宜。如果接种的细胞密度过低，细胞之间的促生长作用很小，也很难使细胞适应从体内的组织环境到被分散后进入独立生存环境的变化过程；如果接种的细胞密度过大，会导致营养物质供应不足，代谢废物积累较快需要经常换液和传代。

 

2、尽快使接种的细胞贴壁，是决定培养能否成功的关键。可以在接种后先将培养瓶置培养箱内培养3h到5h，待细胞贴壁后，再补足培养液继续培养。

 

三、悬浮型原代细胞

 

1、必须保持细胞的悬浮状态。可以通过增加培养液的黏度来帮助细胞呈悬浮状态，如给培养液中加入低浓度的透明质酸复合物。在有搅拌装置的培养器皿内加入培养液，以5ml为最低限度，否则搅拌时会产生气泡对细胞造成伤害。使用这种方式需注意勿使搅拌速度过快，否则既容易使培养液溢出又容易造成污染。如果培养液的量在5ml以下，可以采用旋转瓶培养。给悬浮培养的细胞换液时要注意不要吸出细胞。

 

2、能够进行悬浮培养的细胞，其生命力一般都比较旺盛，体外分裂增殖的速度较快，营养成分消耗大，换液时间隔一般较短。

培养

当原代细胞状态稳定后，就可按照正常细胞培养流程进行培养即可。

血清在细胞培养过程中的重要性不言而喻：

 

• 提供对维持细胞指数生长的激素，基础培养基中没有或量很少的营养物，以及主要的低分子营养物。
• 提供结合蛋白，能识别维生素、脂类、金属和其他激素等，能结合或调节它们所结合的物质活力。
• 有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合，起到解毒作用。
• 是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源。
• 起酸碱度缓冲液作用。
• 提供蛋白酶抑制剂，使在细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活，保护细胞不受伤害。
• 参与细胞冻存。
• ......

 

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