常规细胞实验大汇总~细胞凋亡实验

在很多课题中，细胞实验都是不可或缺的。除了之前我们介绍的细胞复苏、传代和冻存这“基础三件套”之外，还有许多常见的操作，需要我们了解甚至是熟练掌握。

 

磷脂酰丝氨酸外翻分析：又叫做Annexin V法，常用来检测细胞凋亡。

检测原理：

磷脂酰丝氨酸(Phosphatidylserine, PS)正常位于细胞膜的内侧，但在细胞凋亡的早期，PS可从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面，暴露在细胞外环境中。Annexin-V是一种分子量为35~36KD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能与PS高亲和力特异性结合。将Annexin-V进行荧光素(FITC、PE)或biotin标记，以标记了的Annexin-V作为荧光探针，利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生。

碘化丙啶(propidine iodide, PI)是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但在凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI能够透过细胞膜而使细胞核红染。因此将Annexin-V与PI匹配使用，就可以将凋亡早晚期的细胞以及死细胞区分开来。

 

用途：用于区分早期凋亡的细胞与晚期凋亡加坏死的细胞。最适合悬浮培养的细胞。

 

特点：某些细胞的细胞膜外表面带有大量的PS，因而也不能使用该方法(比如巨核细胞、血小板、某些骨髓系细胞)；灵敏度高、方便快捷；只适用于活细胞，不能用能破坏细胞膜完整性的固定剂和穿透剂固定或穿膜。

磷脂酰丝氨酸外翻分析

 

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