细胞培养所用的仪器和耗材

支原体检测与祛除试剂

通常情况下，细胞培养需要在严格的无菌条件下进行，既包括无菌环境，也包括无菌操作。今天就“细胞培养过程中，环境的无菌控制”这一话题，给大家分享一些小技巧，希望可以给各位的实验提供帮助。

细胞培养所用的仪器和耗材

细胞培养需要一些仪器与大量耗材，比如离心机、移液器、显微镜、培养皿、移液管、离心管等，因此掌握清洗、消毒知识是从事细胞培养工作所必须的。

1、耗材的消毒

尽量选择经过灭菌的一次性耗材，移液器枪头可选择顶部有无菌塞的产品，避免气溶胶污染。

2、仪器的消毒

对于显微这样的精密仪器，用专门的消毒纸巾进行擦拭，离心机、移液器可用75%的酒精进行擦拭。

水浴锅、培养箱中的水应至少每4周更换一次，建议加入水槽专用的支原体祛除试剂，预防支原体污染。

仪器也可采用紫外线照射的方法进行消毒：

紫外灯的消毒效果与紫外灯的辐射强度和照射剂量呈正相关，而辐射强度随灯距离增加而降低，照射剂量和照射时间呈正比。因此紫外灯同被照射物的距离和照射时间要适合。

一般来说：距离地面高2米的30W紫外线灯可照射9平方米左右的房间，照射时间为1-2小时。灯管离地面2米以外要延长照射时间，2.5米照射效果较差。紫外灯照射工作台的距离不应超过1.5米，照射时间30分钟为宜。

需要注意的是，紫外线容易使移液器的塑料外壳老化，因此不建议长时间照射。

支原体常规PCR法其原理和荧光定量PCR是一样的，根据支原体核糖体的特异保守序列设计引物，对待检样本DNA进行扩增，通过对扩增产物的大小分析作出判断。

它的优点是准确度很高，特别是德国MB的试剂盒，不仅qPCR的灵敏度可以达到10CFU/ml以上，普通PCR的灵敏度也可以达到各国药典的这个要求。

特异性强，完全涵盖所有可能感染细胞的支原体物种（涵盖欧洲药典规定的9种支原体），根据序列一致性，至少可以检测到107种支原体物种。与细菌和真核DNA无交叉反应。

操作比qPCR多了个跑电泳的步骤。

时间短，2-3小时可以出结果。

唯yi的限制，因为检测的是支原体的DNA，所以无法区分活的支原体。但生物制品在生产过程中，本身不应该产生支原体污染，污染过也不行，所以这个限制反而变成了优点。