细胞培养过程污染与排除

1、污染

空气：操作净化工作台,工作不带口罩,外界气流过强,温度大,含菌

消毒：残留污物

操作：马虎不准确，观念不强

血清：检测不严，支原体和病毒

组织：原代组织有污染，手术中污染，本身是污染组织（溃烂的肿瘤，碘酒消毒后，擦试不净。可能混入污染）

2、污染对细胞的影响

污染时间短、轻，及时排除，细胞可能恢复。

轻：细胞生长缓慢、分裂相，细胞变粗糙，细胞轮 廓增强。

重：停止增殖,分裂相消失,胞质中出现大量堆积物， 细胞变圆,崩溃并从瓶壁脱落 。

3、微生物：

支原体：无致死毒性，可与细胞长期共存，对细胞影响潜在。

霉菌：

细菌：增殖快，短时间在数量上压过细胞产生毒素杀死细胞。

病毒：

真菌：种类繁多，形态各异，呈白色或浅黄色小点，飘浮于培养液面，肉眼可见。

镜下：呈丝状或管状、树枝状丝，纵横交错穿行于细胞间。

支原体：介于细菌与病毒之间，能独立生活的最小微生物无细胞壁，形态多样，0.2um，可通过滤器圆形丝状或梨形，在光镜下很难看清结构。对青霉素普遍有抗药性。

细胞受到支原体污染后出现以下情况：

严重：细胞增殖缓慢，部分细胞变圆，从瓶壁脱落。

轻：无明显变化，或有微细变化由于传代和换液而缓解观察不够细心或缺乏经验，检查不出。

支原体检测：

相差：油浸下观察，暗色微小颗粒，有类似布朗运动，分布细胞表面和细胞之间。

值注：支原体与线粒体相似，需加以区别支原体染色Carnoy固定。

低张处理地依红：地依红2g冰cu酸60ml加水至100ml染色15分钟脱水封固。

光镜:支原体为暗紫色小体,附细胞外或散在细胞之间。

Hoechst33258:为DNA特异结合的荧光探针，支原体DNA能被着色，是检测支原体最方便、有效的一种方法。

醋酸:甲醇（1:3）固定，33258(50g/ml)染色10分钟，漂洗后观察。

工具：微孔滤膜： 能滤除支原体在内的粒子，处理受支原体污染的培养液或血清，但不能去掉附于细胞表面的支原体。

药物：溴尿嘧啶(Bromouracil)支原体的DNA也摄取溴尿嘧啶，用光照射，通过光敏效应杀灭支原体。

 

这款产品有如下几个特点：

1、Water Shield可预防支原体、细菌、真菌、霉菌、孢子污染。不含醛类或叠氮化物，成分安全，对细胞无毒害。

2、Water Shield与蒸馏水按1:200比例混合，可直接加入培养箱水槽或水浴锅中，使用起来很方便。

3、Water Shield含表面活性剂、季铵盐和络合剂，不易挥发，在水中可保持4周有效作用时间。清洗水槽和换水的频率由5天左右，可延长至28-30天左右，其间只要定期往水槽加水即可，省时省力有效率。

目前有越来越多中国实验室在自己的细胞间开始常规使用Water Shield。