传统的支原体检测方法

支原体对细胞培养会带来严重的危害，同时，它的发生率较高，肉眼不易察觉。有报道，在细胞培养室中，它的平均发生率甚至可高达63%。在生物制品中，它的发生率为1%~3%。
污染细胞的支原体主要有五个方面的可能来源：
1. 环境
2. 被污染的细胞
3. 人体表面的携带（如口腔、鼻腔、皮肤等）
4. 实验试剂，如培养基、胰酶等
5. 未彻底消毒的实验器具

传统的支原体检测方法有哪些呢？

方法一：培养法。直接将待测样品涂布在支原体液体或固体培养基上，让其生长，一般需要数周，才能看到菌液变浑浊或有菌落长出。 培养法是支原体检测最经典的方法，其优点是：灵敏度适中和结果可靠。但是培养法的一个主要缺点是时间周期太长，不适合作为细胞污染的快速检测方法。

方法二：DNA的荧光染色法。荧光染剂（如Hoechst 33258，DAPI）可以结合到细胞和支原体的DNA。被支原体污染的细胞经染色后，如果在细胞核外与细胞周围可看到许多大小均一之荧光小点，即为支原体的DNA，则证明有支原体之污染。该法相对培养法快速，但是灵敏度较差。当用荧光染色法发现有支原体后，支原体的清除相对就较困难。

方法三：扫描电镜法。将细胞样品进行扫描电镜拍照，如果被支原体污染可以在细胞表面看到密密麻麻的小颗粒。该方法由于要使用电子显微镜，不适合用作实验室常规检测。

方法四：PCR法。PCR法相对较快，灵敏度也较高。是目前实验室最常用的支原体检测方法。但是PCR法也有自己的致命缺点：细胞培养液上清常含有强烈抑制PCR扩增的代谢产物。因为很多研究人员直接使用细胞培养液上清原液进行PCR检测，如果检测为阴性就认为没有支原体污染。其实，还有一种可能性，就是PCR的扩增被细胞的代谢产物抑制了，而不是没有支原体污染！

通常来说，被污染的细胞应该丢弃，以避免成为污染源。但对于珍贵的细胞，可使用Minerva Biolabs公司的Mynox®或Mynox Gold®。以往别的品牌的支原体清除剂，其实只是抑制剂，它们抑制支原体的DNA合成和蛋白合成，但无法杀除。Mynox®是市面上一款具有杀灭作用的清除剂。它提取自枯草杆菌，可与支原体膜特异性结合，破坏膜通透性，导致支原体膨胀破裂而死。使用Mynox®一般在2-3个小时即可完成清除任务。

Mynox Gold®是Mynox®的升级版，它通过四个疗程产生作用。每个疗程即细胞传一代。它除了包括Mynox®，也包含复合抗生素成分。以往别的品牌的支原体清除剂只是针对支原体的抗生素成分，但也容易产生耐药。Mynox Gold®将Mynox®和抗生素结合，即结合了二者的优点，又去除了二者的不足，因为有的细胞对Mynox®的治疗不太适应，而Mynox Gold®要比Mynox®更加温和，对细胞的毒性效应极小，因而更适用于脆弱的不太好养的细胞。