好文收藏：一键清除「胎牛血清质量」和「支原体污染」对细胞培养的影响

在细胞培养工作中，影响细胞生长最常见的两个因素：一、血清的质量；二、是否能避免支原体的污染。
本文汇总，数位资深细胞培养技术老师，多年经验分享，简明实用，让学生轻松学会怎样挑到好血清，怎样预防和祛除细胞及环境中支原体的污染。
 

第一部分：花一样的钱，怎样挑对好血清

一、细胞最喜欢什么样的血清？
细胞培养大多需要添加动物血清，动物血清富含营养，是细胞培养基的重要添加成分。
血清在细胞培养中起到如下作用：
1. 提供细胞生长代谢所需的生长因子、激素等活性成分和各种营养物质；
2. 提供结合蛋白，通过结合维生素、脂质、微量元素和激素等成分，调节这些成分的释放与活性；
3. 解毒和抗氧化功能；
4. 提供细胞贴壁所需的细胞外基质成分；
5. 缓冲细胞培养基的酸碱度。

动物血清包括胎牛血清、新生牛血清、猪血清、马血清等。其中胎牛血清最为常用。
胎牛血清（简称 FBS）：采自怀孕 5-8 个月母牛中的胎牛。此时胎牛各脏器正处生长分化阶段，血中含有各种促进生长发育的因子，适合各种细胞生长，特别是干细胞，神经细胞，或需要转染、融合的细胞。
新生牛血清（简称 NCS）：采自出生一天至一周内的新生牛。
（注意，胎牛到了孕晚期，胚胎逐渐发育完全，很多促进细胞生长发育的重要因子会自动消失。这是胎牛和新生牛血清，在成分上最大的不同。）
胎牛血清和新生牛血清的价格相差悬殊。你的细胞需要用哪种血清?
选对了血清，就是省钱。

选对血清类型，下一步就要看血清的生产质量。
血清的质控是否合格，首先要要看《检测报告》。不但细菌、真菌、支原体、病毒的检测必须为阴性，而且《检测报告》中的内毒素（Endotoxin）的多少，是未来保证细胞不会发生“慢性中毒”的一个重要指标。内毒素要小于 10EU/ml，最好小于 3EU/ml，而且越低越好。
内毒素：是革兰氏阴性菌的细胞壁成分。它的毒性可以直接参与细胞凋亡。内毒素含量高，容易导致细胞“亚健康”，造成数据不准，甚至老化、死亡，试验失败。
因此，《检测报告》中内毒素的值越低越好。
世界细胞培养学会，依据内毒素对血清进行分级，内毒素含量越低的血清，级别就越高
以胎牛血清为例：
当血清中内毒素含量 ≤10EU/ml 时，此血清为特级胎牛血清；
当血清中内毒素含量 ＞10EU/ml，≤ 25EU/ml 时，此血清为优级胎牛血清；
当血清中内毒素含量 ≥25EU/ml 时，此血清为标准级胎牛血清；
目前，由于同一厂家不同批次的血清，内毒素数值也可能有较大差异，因此很多血清厂家在名称上已不注明级别。但使用者仍可通过《检测报告》，自行甄别挑选。
血清出厂前的质控，还包括理化性质的检查（如外观、pH 值、渗透压）以及促细胞生长能力检查等。这些也是细胞培养效果的重要保证。

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第二部分：细胞培养时要避免支原体的污染
一、支原体污染对细胞的影响
支原体是一类在自然界普遍存在的微生物，可寄生于人和动植物细胞并大量繁殖。它直径在0.1-0.3µm，光学显微镜下看不到，并且可穿过 0.22µm 孔径滤膜，常规培养基的过滤灭菌方法也无法祛除。它没有细胞壁，对常用抗生素也有抗性。在培养细胞中，支原体污染早期，细胞大多症状并不明显，实验人不易发现。污染到中后期，细胞会有如下表现：
 

支原体污染会给细胞培养带来诸多影响（见下图）。对科研而言，会严重干扰实验结果，导致实验数据不准确和时间经费的浪费。对细胞治疗、疫苗和生物制品工业而言，支原体污染还会严重干扰生产，导致产品不合格率上升，生产线停滞等重大事故。
 

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