口腔支原体与肺炎支原体标准品的应用

我国药典规定：“主细胞库、工作细胞库、病毒种子批、对照细胞以及临床治疗用细胞进行支原体检查时，应同时进行培养法和指示细胞培养法(DNA染色法）。病毒类疫苗的病毒收获液、原液采用培养法检查支原体。”

培养法所用的支原体培养基，在使用前需进行灵敏度检查，这时需要用到国家药品检定机构分发的肺炎支原体（ATCC 15531株）和口腔支原体（ATCC 23714株）。在指示细胞培养法中，它们还可作为阳性对照。

在国际上，支原体核酸扩增技术（PCR/qPCR）由于具有操作简单、节约时间、灵敏度高、特异性强等优势，越来越多地用于制药工业的支原体检查。但如要替代培养法，其灵敏度需达到10CFU/ml；如要替代DNA染色法，其灵敏度需达到100CFU/ml，以防止发生漏检。

为验证支原体PCR/qPCR法的灵敏度，德国MB公司提供灭活支原体的灵敏度标准品，经过10CFU或100CFU严格标定，可用于支原体核酸扩增法的方法验证。

一、产品信息

二、产品特点：

1. 支原体株来自英国菌种保藏中心NCTC。

2. 传代次数少，支原体无变异。

3. 产品为冻干粉，保证其稳定性。

4. 分析证书（COA）提供该批次GU：CFU比值（支原体基因组/菌落数比值）。

5. 支原体已灭活，保障细胞实验室安全。

三、操作步骤

步骤1. 离心，收集标准品冻干粉至管底。

步骤2. 每个管中添加1ml你的样品基质。

步骤3. 室温孵育5分钟。

步骤4. 涡旋振荡10秒，再离心10秒。

步骤5. 继续DNA抽提。推荐使用德国MB公司提供的支原体DNA提取试剂盒（英文名：Venor®GeM Sample Preparation Kit，货号56-1010/-1050/-1200）。

步骤6. 抽提的DNA用于PCR/qPCR扩增。

我国《CAR-T细胞治疗产品质量控制检测研究及非临床研究考虑要点》支原体检查部分指出：

“选用商品化的检测试剂，在使用前也需确认其最低检出限不低药典方法。在早期使用时，应与药典方法平行进行，在获得充分的比对数据后才有可能替代药典方法。”

以往已有肺炎支原体和口腔支原体标准菌株，用于培养法的灵敏度检查。但对于PCR/qPCR支原体核酸检测法，国内尚没有用于灵敏度验证的支原体菌株标准品。德国MB公司长期专注支原体产品的开发和支原体的防控，具有二十多年的经验，其所提供的10CFU和100CFU支原体灵敏度标准品被国际各大药厂广泛使用，很好地弥补了这一空白，使得核酸检测法与培养法可以平行开展和比较结果，有助于对核酸检测法进行方法验证，为广大药厂带来了方便。