怎样给细胞做支原体筛查

细胞培养是实验室的常规操作和科研基础。其中，保证细胞不受支原体的污染是决定实验成败的重要环节。然而，支原体污染细胞的发生率又非常高,有报道高达63%。

那么，这些支原体污染是从哪里来的呢？

常可见以下来源：

特别是支原体的污染能通过细胞操作产生的气溶胶或液滴传播。一瓶被支原体污染的细胞足以威胁到其他培养的细胞。因此，定期对细胞培养基、细胞培养上清进行支原体的监测是非常重要的。

 

在支原体的各种检测方法中，常规PCR法以其

①灵敏度高，特异性好；

②时间短，2-3小时出结果；

③操作简单；

④无须昂贵仪器等特点广受青睐。

 

但不同厂家生产的试剂盒质量差异较大（由于引物及内在设计不同），需谨慎选择，尽量在专业人员推荐指导下使用。

 

这里小编向您推荐的是德国Minerva Biolabs公司的常规PCR检测试剂盒（一步法）（英文名：Venor®Gem OneStep），它经过许多用户使用过，广受好评。

产品介绍

其中货号11-8025、11-8050为常备现货。

优势

①高特异性。如存在支原体污染，则只在270bp左右有一条阳性条带，无杂带现象，方便辨识。对其他物种如细菌、真核生物DNA无交叉反应。

 

②可检测的支原体种类丰富。支原体属柔膜体纲、支原体目，下分为支原体科、无胆甾原体科和脲原体科，一共有100多种。Venor®Gem一步法试剂盒可检测85种支原体科成员(含所有污染细胞的常见支原体)、7种无胆甾原体和1种脲原体，十分全面。

 

③所需样本量少，仅需2ul。

 

④灵敏度高，灵敏度高，即使每个反应只有20个基因组拷贝，也可以检测出来。

 

⑤结果可靠。检测时含阴性对照、阳性对照和内控对照，可避免假阴性和假阳性。

 

⑥试剂稳定，操作简单。试剂盒内的PCR mix和阳性对照均为冻干粉，稳定性强。只需复溶后即可立即使用，除样品外，无须添加其他试剂。PCR mix已包含内控对照，无须再单独添加（因此被称为一步法）。

适用范围

适用于支原体的筛查。适合细胞培养物和生物样品，仅作研究使用，不适合药厂的放行检测。不适合临床诊断。

操作步骤

第1步：样本处理

第2步：试剂制备

第3步：PCR体系建立

第4步：启动PCR反应

第5步：电泳结果分析

191bp为内控对照条带，表明PCR反应正常。

 

当样本存在支原体污染时，由于内控对照与支原体DNA存在竞争，内控对照条带变弱（例如当支原体DNA＞103拷贝时）。

 

当支原体DNA＞104拷贝时，内控对照条带会完全消失。

在80-90bp可能存在引物退火形成的二聚体条带，此条带不影响检测结果。