珍贵细胞被细菌污染了怎么办？

　　培养的珍贵细胞如果出现支原体的污染，细胞要保种，不舍得丢掉，我们知道可采用Minerva公司的Mynox或Mynox Gold祛除支原体（具体详请点击文章《细胞状态不好，你排除过支原体吗？》），如果出现细菌污染，我们应该怎么办呢？

 

 

　　对于珍稀细胞系，这的确是一个难题。小威根据北京市耳鼻咽喉科研究所在一篇文章中发表的几种解决方法，总结如下，可供感兴趣的人员参考。

 

　　第一种方法: 抗生素除菌法

 

　　在该文中，当一种人喉癌细胞系被怀疑有细菌污染时，研究人员将培养上清液离心，将沉淀物行常规血琼脂培养，培养5-7d后开始出现灰白色细小菌落，经全自动细菌鉴定仪生化鉴定条检测为嗜麦芽寡养食单胞菌，又进行了15种抗生素的药敏实验，发现该菌对其中3种抗生素敏感，其余均耐药，包括对青链霉素耐药。

 

　　图 对多种抗生素耐药的嗜麦芽寡养食单胞菌

 

　　接下来，研究人员进行了抗生素最佳抑菌浓度的筛选。每种抗生素配了6个浓度梯度。将受污染的细胞接种到96孔板，加入含敏感抗生素的完全培养液，24 h后换无抗生素培养液培养1d。如此重复3次，连续7d。找出最佳抑菌浓度后，研究人员让细胞分别在抗生素最佳抑菌浓度中传代1代至3代，发现细胞生长良好，但撤离抗生素后，重又出现细菌污染。

 

   作者认为：抗生物主要是抑制细菌生长，而不能完全杀死细菌。因此，有针对性地使用抗生素或许可以短期控制住细胞中污染细菌的生长，但不能根除细菌。

 

　　第二种方法: 抗生素联合巨噬细胞吞噬法

 

　　即抗生素处理过的细胞再与小鼠的巨噬细胞共培养3d。3d后换液，弃去巨噬细胞。间隔一周后再用巨噬细胞共培养一次。结果显示，此方法效果不佳。

 

　　第三种方法: 裸鼠体内接种法

 

　　研究人员将受污染的喉癌细胞系细胞按1×106个/ml接种裸鼠腋下皮下，连续观察，当肿物长至约1cm3后，脱颈处死动物，无菌操作取出肿物，做组织细胞培养。

 

 

   结果显示，肿瘤细胞接种裸鼠体内40 d后开始出现肿块，60d长至1cm3左右。之后将组织块培养于含上述筛选过的三种抗生素的完全培养基，14d后改用无抗生素培养，持续培养3周。结果细胞生长良好。之后自然传代8次，冻存1个月后复苏，细胞仍能贴壁生长。取上清液做细菌培养，结果为无菌生长。

 

　　作者认为，细菌在裸鼠体内可被巨噬细胞和中性粒细胞吞噬、NK细胞杀灭，以及被结合抗体的补体杀死。裸鼠体内接种法能彻底杀灭细菌，细胞上清的细菌培养为阴性。细胞生物学特性也保持良好。

 

　　因此，敏感抗生素的筛选和使用可以短期清除污染菌，而动物体内接种才是最有效和彻底的除菌方法。虽然上述受污染的细胞属于肿瘤细胞系，但对其他受污染的细胞，也会带来一定的启示。

 

　　参考文献

 

　　王鸿，张伟，孟娜。 细胞培养中珍贵贴壁细胞污染挽救方法的评价。 首都医科大学学报。2011,32（1）：129-134

 

 

　　Minerva Biolabs GmbH公司简介

 

　　德国Minerva Biolabs GmbH 公司是世界上著名的微生物污染控制公司。其最引以为豪的研发核心，体现在细胞培养和生物制药领域的支原体、细菌和病毒污染控制，其产品和技术在世界上遥遥领先。　公司总部设立于德国柏林，专注微生物污染检测与清除产品的研发和销售。 公司创始人来自于全球闻名的罗伯特·科赫微生物研究所。Minerva公司最引以为豪的研发核心，体现在细胞培养和生物制药领域的支原体、细菌和病毒污染控制。

 

　　此外，Minerva研发的用于『PCR诊断法的专业工具和试剂』，不仅可以检测饮料中的微生物污染，还可以用于检测未申报的肉类制品以及清真、素食产品的质量控制。再加上『验证PCR仪合格性的试剂』以及『清除PCR实验室DNA污染的试剂』，多种产品完整了Minerva的产品线，能够满足客户全方面的需求。在污染控制，临床诊断和水质的检测领域，Minerva不遗余力地开拓进取，是实验人员和生产企业值得信赖的合作伙伴。Minerva公司作为合作制造商，还从事分子生物学试剂、PCR分析和样品制备试剂的设计与生产。

 

　　2005年，上海威正翔禹生物科技有限公司作为全国总代理，将Minerva的优秀产品引入中国。数年来，不断为中国生物研究实验室，以及众多疫苗生产企业，提供了完整高效的，支原体等微生物检测及祛除解决方案。